島津LC-10AT型HPLC注意事項

島津LC-10AT型HPLC注意事項
一、流動相
1、流動相應選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經過濾后使用，過濾時注意區分水系膜和油系膜的使用范圍；
2、水相流動相需經常更換（一般不超過2天），防止長菌變質；
3、使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則A、D（進液口位于混合器下方）放置含鹽流動相，B、C（進液口位于混合器上方）放置不含鹽流動相；A、B、C、D四個儲液器中其中一個為棕色瓶，用于存放水相流動相。
二、樣品
1、采用過濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒；
2、用流動相或比流動相弱（若為反相柱，則極性比流動相大；若為正相柱，則極性比流動相小）的溶劑制備樣品溶液，盡量用流動相制備樣品液；
3、手動進樣時，進樣量盡量小，使用定量管定量時，進樣體積應為定量管的3～5倍；
三、色譜柱
1、使用前仔細閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等；
2、使用符合要求的流動相；
3、使用保護柱；
4、如所用流動相為含鹽流動相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。

四、操作過程
1、開機操作：
（1）、打開電源，用Harb相連接時，注意Harb電源，打開計算機，打開BootpServer（一般啟動時已打開）；
（2）、自上而下打開個組件電源，BootpServer里顯示有信號時（有六行字符），打開工作站（先打開Online）；
（3）、打開沖洗泵頭的10％異丙醇溶液的開關（需用針捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量為準；
（4）、注意各流動相所剩溶液的容積設定，若設定的容積低于最低限會自動停泵，注意洗泵溶液的體積，及時加液；
（5）、使用過程中要經常觀察儀器工作狀態，及時正確處理各種突發事件。
2、先以所用流動相沖洗系統一定時間（如所用流動相為含鹽流動相，必須先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動相），正式進樣分析前30min左右開啟D燈或W燈，以延長燈的使用壽命；
3、建立色譜操作方法，注意保存為自己命名的Method，勿覆蓋或刪除他人的方法及實驗結果；
4、使用手動進樣器進樣時，在進樣前和進樣后都需用洗針液洗凈進樣針筒，洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑，進樣前必須用樣品液清洗進樣針筒3遍以上，并排除針筒中的氣泡；
5、溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動相時注意保護，當發現過濾頭變臟或長菌時，不可用超聲洗滌，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌；
6、實驗結束后，一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個管路30分鐘以上，再用甲醇沖洗。沖洗過程中關閉D燈、W燈；
7、關機時，先關閉泵、檢測器等，再關閉工作站，然后關機，最后自下而上關閉色譜儀各組件，關閉洗泵溶液的開關；
8、使用者須認真履行儀器使用登記制度，出現問題及時向老師報告，不要擅自拆卸儀器。未經操作培訓，不得擅自使用儀器。
自己總結的12條 注意事項
以下12條注意事項是自己在安裝和使用液相色譜儀中的經驗得出的，可能存在某些片面性，如有不當之處請多提寶貴建議。
1、流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45um或更細的膜過濾)。
2、流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應該恢復到室溫后使用。
3、不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。
4、使用緩沖溶液時，做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20ml以上。
5.長時間不用儀器，應該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應該用有機相(如甲醇等)，因為純水易長霉。
6.每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑(如甲醇)等清洗進樣器。
7.C18柱絕對不能進蛋白樣品，血樣、生物樣品。
8.堵塞導致壓力太大，按預柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗。
清洗方法：①以異丙醇作溶劑沖洗；②放在異丙醇中間用超聲波清洗；③用10％稀硝酸清洗。
9.氣泡會致使壓力不穩，重現性差，所以在使用過程中要盡量避免產生氣泡。
10.如果進液管內不進液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進行流動相的清洗。11.要注意柱子的PH值范圍，不得注射強酸強堿的樣品，特別是堿性樣品。
12.更換流動相時應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊清洗，然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。